Isolamento e PCR para detecção de Mollicutes em muco vaginal e sua associação com problemas reprodutivos em ovinos criados na região de Piedade, São Paulo, Brasil / Mollicutes isolation and PCR on ovine vaginal mucous and its association with reproductive problems in Piedade, SP, Brazil

Pesquisou-se Mycoplasma spp, Ureaplasma spp e Acholeplasma laidlawiii em amostras de muco vaginal de 60 ovinos, criados na região de Piedade no Estado de São Paulo, Brasil, que apresentavam ou não vulvovaginite no exame específico do sistema genital. A caracterização desses microrganismos baseou-se no cultivo e detecção do respectivo DNA pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) com os primers para classe Mollicutes (GPO e MGSO), para o gênero Ureaplasma (UGPF e UGPS) e a espécie Acholeplasma laidlawii (UNI e ACH3). A presença de micoplasmas não foi associada com distúrbios do trato reprodutivo dos animais, entretanto todos os isolados obtidos de Ureaplasma spp foram provenientes de animais com distúrbios reprodutivos, sugerindo o possível envolvimento desse agente nas enfermidades da reprodução. A PCR para a espécie Acholeplasma laidlawii detectou somente uma amostra positiva.

It was evaluated the presence of Mycoplasma spp, Ureaplasma spp and Acholeplasma laidlawiii in 60 samples of ovine vaginal mucous with the presence or absence of vulvovaginitis in the specific exam of the reproductive tract. The microorganisms were characterized based on bacteriological culture and DNA detection by Polymerase Chain Reaction (PCR) with specific primers to Mollicutes (GPO and MGSO), Ureaplasma (UGPF and UGPS) and Acholeplasma laidlawii (UNI and ACH3). The presence of mycoplasmas could not be associated with reproductive disorders in animals. The PCR to Acholeplasma laidlawii detected only one positive sample. However, all isolations of Ureaplasma spp were from animals presenting reproductive disorders, suggesting a possible involvement of this agent in reproductive diseases.

Investigation of the possible role of Chlamydophila abortus in reproductive failures in nrazilian herds of domestic ruminants

Chlamydophila abortus (C. abortus) infection is related to reproductive failure in domestic ruminants. Although it has not been well characterized worldwide, this pathogen has already been identified in some European countries and in the USA. In Brazil, preliminary studies have shown serological evidence of C. abortus infection in herds with low antibody prevalence. Until now, the identification of C. abortus in biological samples from females presenting reproductive failures has not been described in Brazilian herds of domestic ruminants. The aim of this study was to evaluate the presence of the C. abortus in a collection of abortions from cattle (n=85), sheep (n=12), and goats (n=8), in samples of vaginal mucus from cows (n=13), sheep (n=90), and goats (n­=20), and in semen from sheep (n=10) and goats (n=5). The specimens (n=243) were evaluated using a PCR assay developed to amplify the 16S-23S rRNA intergenic space of C. abortus. A PCR assay with an internal control, which amplifies a fragment from the ND5 gene of bovine mitochondrial DNA, was used in order to evaluate the efficiency of the DNA extraction and of the PCR reaction. All biological samples (n=243) included in this study were negative for C. abortus in the PCR assay. The internal control enabled the amplification of a product from the bovine mitochondrial ND5 gene in all cattle abortion samples (n=85). Given the serological evidence indicating the presence of C. abortus infection in Brazilian herds of domestic ruminants, and considering the wide sampling evaluated, the failure to identify C. abortus in this survey suggests that the frequency of clinical signs in infected animals may be low or even absent.

A infecção pela Chlamydophila abortus (C. abortus) em ruminantes domésticos está relacionada com distúrbios reprodutivos. Apesar de ainda pouco estudada em todo o mundo, a infecção já foi identificada em alguns países europeus e também nos EUA. No Brasil, estudos preliminares demonstraram evidências sorológicas da infecção em alguns rebanhos com baixa prevalência de anticorpos. Até o momento ainda não foi possível a identificação de C. abortus a partir de material biológico proveniente de fêmeas com problemas reprodutivos em rebanhos brasileiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença da C. abortus em uma coleção de abortos bovinos (n=85), ovinos (n=12) e caprinos (n=8), em amostras de muco vaginal bovino (n=13), ovino (n=90) e caprino (n=20), e em sêmen ovino (n=10) e caprino (n=5). As amostras biológicas (n=243) foram avaliadas por meio de técnica de PCR desenvolvida para a amplificação do espaço intergênico 16S-23S RNAr da C. abortus. Um controle interno da reação, que amplifica um fragmento do gene ND5 do DNA mitocondrial de bovino, foi utilizado para a avaliação da eficiência da extração e da amplificação do DNA nas amostras provenientes de abortamento bovino. Todas as amostras biológicas (n=243) incluídas nesse estudo resultaram negativas para a C. abortus na PCR. O controle interno da reação possibilitou a amplificação de um produto do gene ND5 mitocondrial bovino em todas as amostras de aborto bovino (n=85). Apesar de evidências,,sorológicas indicarem a presença da infecção por C. abortus em rebanhos de ruminantes no Brasil, e considerando o número de amostras biológicas avaliadas, a não identificação de C. abortus nesse estudo sugere que a frequência de sinais clínicos nos animais infectados pode ser baixa ou mesmo ausente.

Occurrence of antibodies against Leptospira spp. in horses of the urban area of Londrina, Paraná, Brazil.

A total of 320 horses were studied in this paper, both male and female, between two and 17 years of age, which were used for traction of wagons in the urban area of the municipality of Londrina (PR). These animals were kept, after their daily work, in abandoned areas or plots, in the outskirts of the urban area of the city. When these animals were attended by the veterinarians, between 1996 and 2005, none of them presented symptoms suggesting leptospirosis. The most frequent reasons for the visit were loss of weight, unwillingness for work, parasitism, laminess, and wounds. Microscopic Seroagglutination Test (SAM), with 22 Leptospira serovars, was performed in sera sample from all these animals. The aim of this study was to investigate the occurrence of antibodies against Leptospira spp. in horses from the urban area of Londrina (PR). From the samples tested, 214 (66.88%) were considered positive, with titers between 100 and 3200, being that 49 (22.90%) presented antibodies against a single serovar of Leptospira, and 165 (77.10%) samples presented antibodies against two or more serovars simultaneously, where in 88 (53.33%) it was possible to characterize the most likely probable serovar. Antibodies against the serovar Icterohaemorrhagiae were detected in 32 (23.36%) animals.

Occurrence of antibodies against Leptospira spp. in horses of the urban area of Londrina, Paraná, Brazil

A total of 320 horses were studied in this paper, both male and female, between two and 17 years of age, which were used for traction of wagons in the urban area of the municipality of Londrina (PR). These animals were kept, after their daily work, in abandoned areas or plots, in the outskirts of the urban area of the city. When these animals were attended by the veterinarians, between 1996 and 2005, none of them presented symptoms suggesting leptospirosis. The most frequent reasons for the visit were loss of weight, unwillingness for work, parasitism, laminess, and wounds. Microscopic Seroagglutination Test (SAM), with 22 Leptospira serovars, was performed in sera sample from all these animals. The aim of this study was to investigate the occurrence of antibodies against Leptospira spp. in horses from the urban area of Londrina (PR). From the samples tested, 214 (66.88 percent) were considered positive, with titers between 100 and 3200, being that 49 (22.90 percent) presented antibodies against a single serovar of Leptospira, and 165 (77.10 percent) samples presented antibodies against two or more serovars simultaneously, where in 88 (53.33 percent) it was possible to characterize the most likely probable serovar. Antibodies against the serovar Icterohaemorrhagiae were detected in 32 (23.36 percent) animals.

Foram estudados 320 eqüinos, machos e fêmeas com idade entre dois a 17 anos, utilizados para tração de carroças na área urbana do município de Londrina (PR). Estes animais eram mantidos, após a jornada diária de serviço, em áreas ou terrenos baldios, localizados na periferia da área urbana do município. Por ocasião do atendimento, realizado entre 1996 e 2005, no Hospital Veterinário da Universidade Estadual de Londrina, nenhum dos animais apresentou sintomas sugestivos de leptospirose, sendo os motivos mais freqüentes, o emagrecimento, a indisposição para o trabalho, a verminose, problemas no sistema locomotor e feridas. A prova de soroaglutinação microscópica (SAM), com 22 sorovares de Leptospira, foi realizada em amostra de soro de todos os animais. O objetivo deste trabalho foi investigar a ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp. em eqüinos da área urbana do município de Londrina. Foram consideradas positivas 214 (66,88 por cento) amostras de soros com títulos entre 100 e 3200, sendo em 49 (22,90 por cento) detectadas anticorpos contra um único sorovar de Leptospira e em 165 (77,10 por cento) amostras com anticorpos contra dois ou mais sorovares simultâneamente, sendo em 88 (53,33 por cento) destes caracterizado o sorovar mais provável. Anticorpos contra o sorovar Icterohaemorrhagiae foram detectados em 32 (23,36 por cento) animais.

Isolation of Leptospira spp from dogs, bovine and swine naturally infected

O isolamento da Leptospira permite o diagnóstico definitivo da infecção. Um dos inconvenientes do cultivo é a contaminação por microrganismos. O objetivo deste trabalho foi descrever o isolamento de Leptospiras de cães, bovinos e suínos naturalmente infectados. Foram utilizadas amostras de urina de 14 cães, três bovinos, e amostras de rim, fígado, ovário e corpo de útero de 36 matrizes suínas de descarte sem histórico sanitário. As amostras de urina e tecidos foram semeadas em meio de cultura. Foi utilizado o meio de cultura Ellinghausen-McCullough-Johnson-Harris (EMJH) modificado acrescido de 5-fluorouracil, cloranfenicol, vancomicina, ácido nalidíxico e neomicina. A incubação foi realizada a 28°C por 24 horas, seguida de subcultura em EMJH modificado sem antibiótico. Com esta metodologia, foi possível o isolamento de Leptospira spp da urina de 11 cães e dois bovinos e de fragmentos de fígado de dois suínos.

Leptospirosis in slaughtered sows: serological and histopathological investigation

Swine leptospirosis is recognized world wide as an important cause of reproductive failure. Serum and histo-pathological examinations have been constantly used to diagnose this disease. This study was carried out on slaughtered sows from Northern Paraná State to compare serum findings with kidney, liver, ovary and uterus histo-pathological examinations. The microscopic serum-agglutination carried out on 36 animals detected 24 with titles > 100 and 12 negative (< 100). The histopathological examinations made on livers, kidneys, ovaries and uterus stained with hematoxylin-eosin, were carried out on 16 randomly chosen animals, 11 from the groups with > 100 serological titles and five from the negative group. The results showed that all the 16 animals had indicative lesions in the liver or in one of the kidneys. There were no lesions in the ovaries or uterus. Microscopic serum-agglutination title readings between 20 and 80 were detected in animals of the group considered negative with title < 100.

Soroprevalência, epidemiologia e avaliaçào ocular da toxoplasmose humana na zona rural de Jaguapita (Paraná), Brasil / Seroprevalence, epidemiology, and ocular evaluation of human toxoplasmosis in a rural area in Jaguapita, Paraná, Brazil

A toxoplasmose é uma protozoonose de distribuiçao mundial, que pode infectar uma grande variedade de espécies. No presente estudo, avaliou-se a presença de toxoplasmose em 345 moradores da zona rural do Município de Jaguapita, Estado do Paraná, Brasil. A frequência dos títulos nas amostras de soro humano foi comparada com a frequência dos títulos encontrados em 1420 amostras de diversas espécies animais com as quais os moradores da regiao tinham contato. A prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi de 66 por cento entre a populaçao do estudo (reaçao de imunofluorescência indireta). Foram considerados positivos os títulos maiores ou iguais a 16. O maior título encontrado foi de 65.536 (1 por cento) e os títulos mais frequentes foram de 256 (29 por cento) e 1.024 (19 por cento). A comparaçao entre seres humanos e animais revelou uma correlaçao positiva e significativa entre a distribuiçao dos títulos de anticorpos de humanos e felinos (r=0,78;P=0,01) e de humanos e caninos (r=0,64;P=0,05). Os participantes do estudo foram também testados pela tela de Amsler, sendo que 22 por cento deles (75/345) relataram algum tipo de alteraçao ocular; destas pessoas, 77 por cento (58/75) foram sororreagentes a toxoplasmose. Quarenta e uma das 58 pessoas foram encaminhadas para exame oftálmico de fundo de olho. Neste grupo, 22 por cento dos pacientes (9/41) apresentaram lesoes características de coriorretinite cicatrizada, sugestivas de toxoplasmose ocular (idade entre 34 e 78 anos). Nenhum paciente apresentou processo inflamatório. Dentre seis pacientes (67 por cento) com lesoes unilaterais, quatro apresentaram título de anticorpos de 256. O inquérito epidemiológico revelou que os indivíduos sororreagentes tinham 2,06 vezes mais possibilidades de apresentarem problemas oculares do que os nao reagentes. Neste sentido, nao foram verificadas diferenças significativas com relaçao a sexo, contato com animais, consumo de carne crua ou mal passada e leite cru e abate de animais para consumo próprio. Os resultados sugerem que a toxoplasmose está amplamente distribuída na regiao, com significativa incidência de lesoes oculares provocadas pelo Toxoplasma gondii. E recomendável um maior controle por parte das autoridades sanitárias, visando diminuir o risco de infeçao toxoplásmica, principalmente entre gestantes

Soroprevalência, epidemiologia e avaliaçao ocular da toxoplasmose humana na zona rural de Jaguapita (Paraná), Brasil / Seroprevalence, epidemiology, and ocular evaluation of human toxoplasmosis in a rural area in Jaguapita, Paraná, Brazil

A toxoplasmose é uma protozoonose de distribuiçao mundial, que pode infectar uma grande variedade de espécies. No presente estudo, avaliou-se a presença de toxoplasmose em 345 moradores da zona rural do Município de Jaguapita, Estado do Paraná, Brasil. A frequência dos títulos nas amostras de soro humano foi comparada com a frequência dos títulos encontrados em 1420 amostras de diversas espécies animais com as quais os moradores da regiao tinham contato. A prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi de 66 por cento entre a populaçao do estudo (reaçao de imunofluorescência indireta). Foram considerados positivos os títulos maiores ou iguais a 16. O maior título encontrado foi de 65.536 (1 por cento) e os títulos mais frequentes foram de 256 (29 por cento) e 1.024 (19 por cento). A comparaçao entre seres humanos e animais revelou uma correlaçao positiva e significativa entre a distribuiçao dos títulos de anticorpos de humanos e felinos (r=0,78;P=0,01) e de humanos e caninos (r=0,64;P=0,05). Os participantes do estudo foram também testados pela tela de Amsler, sendo que 22 por cento deles (75/345) relataram algum tipo de alteraçao ocular; destas pessoas, 77 por cento (58/75) foram sororreagentes a toxoplasmose. Quarenta e uma das 58 pessoas foram encaminhadas para exame oftálmico de fundo de olho. Neste grupo, 22 por cento dos pacientes (9/41) apresentaram lesoes características de coriorretinite cicatrizada, sugestivas de toxoplasmose ocular (idade entre 34 e 78 anos). Nenhum paciente apresentou processo inflamatório. Dentre seis pacientes (67 por cento) com lesoes unilaterais, quatro apresentaram título de anticorpos de 256. O inquérito epidemiológico revelou que os indivíduos sororreagentes tinham 2,06 vezes mais possibilidades de apresentarem problemas oculares do que os nao reagentes. Neste sentido, nao foram verificadas diferenças significativas com relaçao a sexo, contato com animais, consumo de carne crua ou mal passada e leite cru e abate de animais para consumo próprio. Os resultados sugerem que a toxoplasmose está amplamente distribuída na regiao, com significativa incidência de lesoes oculares provocadas pelo Toxoplasma gondii. E recomendável um maior controle por parte das autoridades sanitárias, visando diminuir o risco de infeçao toxoplásmica, principalmente entre gestantes

Soroepidemiologia da toxoplasmose em gatos e cäes de propriedades rurais do município de Jaguapitä, Estado do Paraná, Brasil / Seroepidemiology of toxoplasmosis in cats and dogs from rural properties of Jaguapitä county, Paraná state, Brazil

O presente estudo determinou a soroprevalência da toxoplasmose em gatos e cäes localizados na zona rural do município de Jaguapitä, Estado do Paraná, através da reaçäo de imunofluorescência indireta para detecçäo de anticorpos anti-Toxoplasma gondii da classe IgG, considerando-se reagentes títulos maiores ou iguais a 1:16. Observou-se uma prevalência de 73 porcento em 163 soros felinos e 84,1 porcento em 189 soros caninos, sendo que nas duas espécies näo houve diferença em relaçäo ao sexo. Em relaçäo aos felinos, o título mais freqüente foi 1:4096 (28,6 porcento) e o maior título encontrado foi de 1:65536 (0,8 porcento), apresentando diferenças estatísticas com relaçäo às faixas etárias, e com aumento da soropositividade com a idade. Os títulos mais freqüentes nos caninos foram 1:64 (38,4 porcento), e o maior título foi de 1:4096 (1,9 porcento), com soropositividade menor nos animais com menos de 8 meses. Näo houve correlaçäo significativa na distribuiçäo dos títulos de anticorpos entre felinos e caninos. Através do presente trabalho, verificou-se que o T. gondii está amplamente distribuído na populaçäo felina e canina da regiäo.